Separação de Endoderme e Epiderme: mudanças entre as edições
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Misturam-se três soluções em mesma proporção: | Misturam-se três soluções em mesma proporção: | ||
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Divide-se a mistura em dois copos de Becker e ajusta-se o pH. | Divide-se a mistura em dois copos de Becker e ajusta-se o pH. Deixam-se ambas a 4°C. | ||
* Solução A: pH = 4,5 | * Solução A: pH = 4,5 | ||
* Solução B: pH = 2,5 | * Solução B: pH = 2,5 | ||
=== Métodos === | |||
A temperatura do laboratório deve ser 18°C. | |||
# As hidras devem estar em jejum por dois dias antes do experimento. Devendo ser limpas nos dias anteriores ao procedimento. | |||
# Faça o corte das cabeças e pés das hidras. | |||
# Lave os troncos 3 vezes em HM. | |||
# Coloque-os por 5 minutos na solução A e 1,5 ''(0,5)'' minutos na solução B, ambas a 4°C (o controle da temperatura é muito importante). | |||
# Transfira os troncos com cuidado para o petri com DM a 18°C. | |||
# Dentro de poucos minutos os tecidos estarão separados (e ectoderme se contrai na forma de um anel). Usamos duas pinças para a separação - com a primeira seguramos a endoderme e com a segunda puxamos a ectoderme. | |||
# Coloque os tecidos de ecto e de endo em tubos de ensaio com DM a 18°C. Pipete o líquido para que as forças de cisalhamento ajudem a separar as células. Deixe decantar por 1 minuto. | |||
# Centrifugue à velocidade lenta de 1400 r.p.m. de 4 a 10 minutos. | |||
# Leve à geladeira (4°C) por algo entre 30 e 60 minutos. | |||
# Transfira a massa celular para o petri com DM a 18°C. Caso seja necessário, corte em tamanhos desejados. | |||
Edição das 17h11min de 9 de março de 2015
Materiais
Procaína
- Procaína: 1 g diluído em 100 mL de água destilada.
Demais
Misturam-se três soluções em mesma proporção:
- 50 mL de procaína
- 50 mL de HM
- 50 mL de DM
Divide-se a mistura em dois copos de Becker e ajusta-se o pH. Deixam-se ambas a 4°C.
- Solução A: pH = 4,5
- Solução B: pH = 2,5
Métodos
A temperatura do laboratório deve ser 18°C.
- As hidras devem estar em jejum por dois dias antes do experimento. Devendo ser limpas nos dias anteriores ao procedimento.
- Faça o corte das cabeças e pés das hidras.
- Lave os troncos 3 vezes em HM.
- Coloque-os por 5 minutos na solução A e 1,5 (0,5) minutos na solução B, ambas a 4°C (o controle da temperatura é muito importante).
- Transfira os troncos com cuidado para o petri com DM a 18°C.
- Dentro de poucos minutos os tecidos estarão separados (e ectoderme se contrai na forma de um anel). Usamos duas pinças para a separação - com a primeira seguramos a endoderme e com a segunda puxamos a ectoderme.
- Coloque os tecidos de ecto e de endo em tubos de ensaio com DM a 18°C. Pipete o líquido para que as forças de cisalhamento ajudem a separar as células. Deixe decantar por 1 minuto.
- Centrifugue à velocidade lenta de 1400 r.p.m. de 4 a 10 minutos.
- Leve à geladeira (4°C) por algo entre 30 e 60 minutos.
- Transfira a massa celular para o petri com DM a 18°C. Caso seja necessário, corte em tamanhos desejados.
