Agregado Celular

• Alimentação

0h: alimente as hidras

8h: alimente as hidras

• Separação

Colete hidras sem brotos para o experimento.

24h: limpe as hidras

48h: comece o experimento

• Limpeza

Coloque as hidras num becker pequeno e adicione aproximadamente 200 mL de HW.

Faça Faça redemoinho duas vezes na água para limpá-las.

Despeje a água e repita o processo mais uma vez.

Passe as hidras para um becker maior, com 500 mL de HW limpa e coloque o becker num agitador magnético por cerca de 15 ou 30 minutos.

• Dissociação celular

Remova as cabeças e os pés da hidras.

Passe os proncos para um tubo de ensaio.

Lave os troncos três vezes em HW gelado (4°C).

Retire toda a HW.

Lave duas vezes em DM gelado (4°C).

Retire este DM e adicione 5 mL de DM limpo gelado.

Leve ao refrigerador por 20 ou 30 minutos.

Coloque os troncos numa placa de vidro de picoteie-os.

Junte o que foi picado e passe para um tubo de ensaio (se quiser aproveitar o mesmo tubo, esvazie-o primeiro para depois colocar DM limpo).

Encha o tubo até 5 mL de DM gelado (4°C).

Pipete vigorosamente até dissociar o tecido.

Coloque o tubo no gelo por 2 ou 4 minutos (para deixar os pedaços grande decantarem).

Preparar um tubo de ensaio com filtro.

Pegue o tubo que estava no gelo e sugue todo o líquido, dexando no fundo aproximandamente 1 mL.

Passe essa quantidade pelo filtro.

No tubo com aproximadamente 1 mL encha com 4 mL e pipete novamente.

Passe esse líquido pipetado no mesmo filtro.

Coloque o tubo de ensaio que recebeu todo o filtrado na centrífuga: 1500 r.p.m. (4 de centrífuga) por 7 a 10 minutos.

Deixe descansar no gelo por 20 ou 30 minutos.

Passe todo o agregado para um petry dish e corte odo tamanho desejado.

Coloque o agregado em DM (20°C).

• Troca de DM para HM

6 ou 8 horas após o agregado estar pronto, faça uma troca de todo o DM por HM.