|
|
(2 revisões intermediárias pelo mesmo usuário não estão sendo mostradas) |
Linha 1: |
Linha 1: |
| === Materiais ===
| |
|
| |
|
| '''Procaína'''
| |
| * Procaína: 1 g diluído em 100 mL de água destilada.
| |
|
| |
| '''Demais'''
| |
| Misturam-se três soluções em mesma proporção:
| |
| * 50 mL de procaína
| |
| * 50 mL de HM
| |
| * 50 mL de DM
| |
|
| |
| Divide-se a mistura em dois copos de Becker e ajusta-se o pH. Deixam-se ambas a 4°C.
| |
| * Solução A: pH = 4,5
| |
| * Solução B: pH = 2,5
| |
|
| |
| === Métodos ===
| |
| A temperatura do laboratório deve ser 18°C.
| |
|
| |
| # As hidras devem estar em jejum por dois dias antes do experimento. Devendo ser limpas nos dias anteriores ao procedimento.
| |
| # Faça o corte das cabeças e pés das hidras.
| |
| # Lave os troncos 3 vezes em HM.
| |
| # Coloque-os por 5 minutos na solução A e 1,5 ''(0,5)'' minutos na solução B, ambas a 4°C (o controle da temperatura é muito importante).
| |
| # Transfira os troncos com cuidado para o petri com DM a 18°C.
| |
| # Dentro de poucos minutos os tecidos estarão separados (e ectoderme se contrai na forma de um anel). Usamos duas pinças para a separação - com a primeira seguramos a endoderme e com a segunda puxamos a ectoderme.
| |
| # Coloque os tecidos de ecto e de endo em tubos de ensaio com DM a 18°C. Pipete o líquido para que as forças de cisalhamento ajudem a separar as células. Deixe decantar por 1 minuto.
| |
| # Centrifugue à velocidade lenta de 1400 r.p.m. de 4 a 10 minutos.
| |
| # Leve à geladeira (4°C) por algo entre 30 e 60 minutos.
| |
| # Transfira a massa celular para o petri com DM a 18°C. Caso seja necessário, corte em tamanhos desejados.
| |